Tinción de Papanicolaou original (tinción de Papanicolaou) Se pueden utilizar reactivos disponibles comercialmente. Es fundamental utilizar una solución de hematoxilina completamente madura , ya que solo entonces se puede evaluar la estructura de la cromatina nuclear, el criterio esencial de malignidad. Solo se deben usar frotis fijados en húmedo . Cualquier artefacto de secado perjudica la evaluación citológica. Receta 1: Tinción de Papanicolaou original
1. Etanol 96% 10 min
2. Serie descendente de etanol1 a. 96% b. 80% c. 60% re. 50% e. agua destilada
3. Hematoxilina
4. Agua destilada
5. HCl al 0,25 %
6. Azulado en agua del grifo
7. Serie ascendente de etanol a. 50% b. 60% c. 80% re. 96% 8. Naranja G
9. 96% etanol I
10. 96% etanol II
11. EA 50 12. 96% etanol I
13. 96% etanol II
14. Xileno I
15. Xileno II
16. Cubrir con cubreobjetos Utilice únicamente una solución de hematoxilina bien madura
Vea a continuación: Dos excelentes ejemplos de fijación y tinción perfectas establecidos en la red iPath por colegas de Afganistán y Argentina.
Importante Los períodos de tiempo indicados en la receta deben respetarse estrictamente para lograr un resultado de tinción óptimo.
Figura 1: Carcinoma ductal invasivo: observe la estructura de cromatina gruesa (Dr. Samera/ Mazar i-Sharif, Papanicolaou, aumento original 1000x)
2. Papanicolaou de tinción rápida
El método puede aplicarse para controlar la celularidad de los aspirados con aguja fina. La ventaja en comparación con DiffQick u otras tinciones de Romanowski es que las muestras aún pueden usarse para pruebas inmunocitoquímicas. La desventaja es la estabilidad disminuida del colorante. Sin embargo, esto se compensa fácilmente con la posibilidad de volver a teñir con el procedimiento completo de Papanicolaou.
Receta 2: Modificación de la tinción de Papanicolaou: método de tinción rápida 1. Frotis fijados en solución de Delaunay 2. Concentraciones de alcohol descendentes 3. (96%, 80%, 60%, 50%, agua destilada) 4. Hematoxilina 5. Azulado en agua corriente de 20 – 30°C 6. EA 50 7. Alcohol 96% I + II 8. Xileno
Cubreobjetos En cada solución de alcohol, mueva el portaobjetos de vidrio de 20 a 30 veces suavemente hacia ariba y hacia abajo. En el cambio de una concentración a la siguiente, el líquido debe escurrirse uniformemente sin dejar rayas. 2. Tinción rápida H&E La tinción rápida H&E es muy aplicable a las muestras citológicas y conduce a resultados de tinción similares a los de la tinción de Papanicolaou, si los frotis se fijaron húmedos y solo se usó una solución de hematoxilina bien madura. El procedimiento de tinción es el mismo que en H&E para histología con dos excepciones:
a) Requiere menos tiempo porque se realiza directamente en los frotis citológicos: por ejemplo, en raspados de tejido fresco durante los exámenes intraoperatorios.
b) La eosina debe diluirse 1:10 en comparación con la tinción histológica de H&E, y los portaobjetos solo deben sumergirse brevemente en la eosina para evitar teñir demasiado el citoplasma, lo que disminuiría el contraste de tinción entre el núcleo y el citoplasma.
3. Tinción de May-Grünwald-Giemsa (MGG) Esta modificación del método de Romanowsky u otra como la tinción de Wright se utilizan en frotis secados al aire, donde están bien representados los orgánulos del citoplasma plano extendido de las células secadas al aire.
Ventajas:
• La realización es sencilla y los frotis están listos para microscopía en 10 min. • El método es más útil en el diagnóstico de trastornos hematológicos y para diferenciar poblaciones de células hematológicas en frotis de sangre o médula ósea y sedimentos de líquido de lavado broncoalveolar.
• MGG tiñe la mayoría de los tipos de bacterias
Desventajas: • La calidad del resultado de la tinción es difícil de estandarizar ya que depende del valor de pH del agua • Especialmente en muestras no hematológicas, no es posible distribuir las células de interés como una monocapa. Los grupos a menudo tridimensionales de células de carcinoma en tales muestras aparecen principalmente bajo el microscopio como masas azules no transparentes que impiden un diagnóstico definitivo del tipo de tumor. • La estructura de la cromatina nuclear no suele estar tan bien representada como en la tinción de Papanicolaou.
• La inmunocitoquímica en frotis previamente teñidos con MGG no es posible. • En comparación con la tinción de Papanicolaou, el resultado de la tinción depende más firmemente de la conservación de las células. Esto juega un papel, especialmente en especímenes preparados a partir de fluidos de efusión. Incluso grados menores de autólisis, causados por el período de tiempo entre la punción y la elaboración del líquido, dan una apariencia aplastada a las células, y sus núcleos se vuelven pálidos y sin estructura.
4. Tinción de Wright Esta variante ofrece una espléndida tinción de células mielógenas en frotis de sangre y aspirados de médula ósea. Debido a las mismas razones que la tinción con MGG, no es práctico teñir material no hematológico, incluidas las aspiraciones con aguja fina de linfomas.
5. Diferencia rápida Aunque se realiza rápida y fácilmente, esta tinción no se puede recomendar como un método de tinción estándar en un laboratorio citológico orientado a la calidad, ya que principalmente permite estimar el contenido celular de una muestra, pero solo en raras ocasiones permite un diagnóstico definitivo del tipo de tumor. Este método no permite superponer la tinción de Papanicolaou o las incubaciones inmunocitoquímicas en el mismo frotis. Por lo tanto, este método no se describe más aquí. La tinción H&E o la tinción rápida de Papanicolaou son igualmente sencillas y no dificultan la tinción excesiva con una tinción de Papanicolaou regular e inmunocitoquímica en el mismo frotis.
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